BHT-101細胞，BHT-101細胞株的污染及制止

產品名稱：BHT-101細胞

中文名稱：未分化癌細胞

貨    號：BHT-101

規(guī)    格：1~3*106細胞/25cm2培養(yǎng)瓶

BHT-101細胞，BHT-101細胞株的污染及制止
按現(xiàn)代的觀念，凡是混入培養(yǎng)環(huán)境中對細胞生存產生有害的成分和造成細胞不純的異物都應該視為污染。根據這一概念，組織培養(yǎng)污染物應包括生物（真菌、細菌、病毒和支原體）、化學物質（影響細胞生存、非細胞所需的化學成分）、細胞（非同種的其他細胞）。其中一微生物zui為多見。另外，隨著使用細胞種類增多，不同細胞交叉污染，尤其是Hela細胞的污染也時有發(fā)生，從而造成細胞不純。
一、污染途徑 污染物，特別是微生物常通過下列途徑進入培養(yǎng)體系，造成污染
1、空氣：空氣是微生物及塵埃顆粒傳播的主要途徑。空氣流動性大，如果培養(yǎng)操作場地于外界隔離不嚴格或消毒不充分，外界不潔空氣很容易進入造成污染。因此，培養(yǎng)設施不能設在通風場所。無菌操作應在凈化臺內進行，工作時要帶口罩，以免因講話、咳嗽等使外界污染進入操作面，造成污染。
2、器材：各種培養(yǎng)器皿、器械消毒不*和洗刷不干凈導致污染，另外需要對培養(yǎng)箱進行定期消毒，防止形成污染
3、操作：實驗操作無菌觀念不強，技術不熟練，使用污染的器皿或封瓶不嚴等，都可以造成污染。培養(yǎng)兩種細胞以上時，操作不規(guī)范，交叉使用吸管或培養(yǎng)液、瓶等有可能導致細胞交叉污染。
4、血清：有些血清在生產時就已經被支原體或病毒等污染，變成了污染。
5、組織樣本：原代培養(yǎng)的污染多數來源于組織樣本；取材時碘酒消毒后脫碘不*，可造成碘混入組織，細胞或培養(yǎng)液中，影響細胞細胞生長。
二、污染對培養(yǎng)細胞的影響及污染的檢測
由于體外培養(yǎng)細胞自身沒有抵抗污染的能力，而且培養(yǎng)基中的抗生素抗污染能力有限，因而培養(yǎng)細胞一旦發(fā)生污染多數將無法挽回。細胞污染早期或污染程度較輕時，如果能及時去除污染物，部分細胞有可能恢復、但是當污染物持續(xù)存在培養(yǎng)環(huán)境中，輕者細胞生長緩慢，分類象減少，細胞變得粗糙，輪廓增強細胞漿出現(xiàn)顆粒、污染較嚴重，細胞增值停止，分裂象消失，細胞質中出現(xiàn)大量堆積物，細胞變圓、脫壁。
（一）細菌污染對培養(yǎng)細胞的影響及污染物的檢測
常見的污染細菌有大腸桿菌、假單孢菌、葡萄球菌等。細菌污染初期由于培養(yǎng)體系的抗生素作用， 其繁殖處于抑制狀態(tài)，細胞生長不受明顯影響，污染情況用倒置顯微鏡觀察不易判斷。懷疑培養(yǎng)細胞有細菌污染時，取10ml細胞懸液離心1000轉5分鐘，沉淀中加入無抗生素培養(yǎng)液2ml,將細胞放培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
如果培養(yǎng)無真的細菌污染，24小時內可以獲得陽性結果。當污染的細菌量比較大或者細菌增殖到一定基數時，大約每20分鐘一代，會使培養(yǎng)系統(tǒng)中很快產生大量細菌，后者不僅可以消耗培養(yǎng)系統(tǒng)中的養(yǎng)分，還能釋放大量代謝產物。幾個小時后，增殖的細菌就可以導致培養(yǎng)液外觀渾濁，肉眼就可以判斷。細菌污染大多數可以改變培養(yǎng)液pH，使培養(yǎng)液變渾濁、變色。用相差顯微鏡觀察，可見滿視野都是點狀的細菌顆粒，原來的清晰培養(yǎng)背景變得模糊，大量的細菌甚至可以覆蓋細胞，對細胞的生存構成威脅。用青霉素、鏈霉素可以預防細菌污染有效。
（二）真菌污染對細胞的影響及污染物的檢測
微生物污染中以真菌zui多，真菌種類繁多，形態(tài)各異，但是污染后易于發(fā)現(xiàn)，大多呈白色或淺黃色小點漂浮于培養(yǎng)液表面，肉眼可見；有的散在生長，鏡下可見呈絲狀、管狀、樹枝狀，縱橫交錯穿行于細胞之間。念珠菌和酵母菌卵圓形，散在細胞周邊和細胞之間生長。真菌生長迅速，能在短時間內抑制細胞生長、產生有毒物質殺死細胞。抗真菌制劑對預防和排除真菌污染有效。
（三）支原體污染對細胞影響及污染物的檢測
細胞培養(yǎng)（特別是傳代細胞）被支原體污染是個世界性問題,是細胞培養(yǎng)zui常見的、干擾試驗結果的一種污染。但由于不易被察覺，有些污染的細胞仍在被應用。研究表明，95％以上是以下四種：口腔支原體（M.orale）、精氨酸支原體（M.arginini）、豬鼻支原體（M.hyorhinis）和萊氏無膽甾原體（A.laidlawii），為牛源性。以上是zui常見的污染細胞培養(yǎng)的支原體菌群，但能夠污染細胞的支原體種類是很多的，國外調查證明，大約有二十多種支原體能污染細胞，有的細胞株可以同時污染兩種以上的支原體。據查，目前各實驗室使用的二倍體細胞和傳代細胞中約有11%的細胞受到支原體污染。
污染來源包括工作環(huán)境污染、操作者本身污染（一些支原體在人體是正常菌群）、培養(yǎng)基污染、污染支原體的細胞造成的交叉污染、實驗器材帶來的污染和用來制備細胞的原始組織或器官的污染。支原體污染后，因為它們不會使細胞死亡可以與細胞長期共存，培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁，細胞無明顯變化，外觀上給人以正常感覺，實則細胞手到多方面潛在影響，如引起細胞變形，影響DNA合成，抑制細胞生長等。
細胞培養(yǎng)中，主要從以下幾個方面來預防支原體的污染：控制環(huán)境污染；嚴格實驗操作；細胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌；在細胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。
支原體污染細胞后，特別是重要的細胞株，有必要清除支原體，常用方法有抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補體聯(lián)合處理。支原體zui突出的結構特征是沒有細胞壁，一般來講，對作用于細胞壁生物合成的抗生素，如 -內酰胺類、萬古霉素等*不敏感；對多粘菌素（polymycin）、利福平、磺胺藥物普遍耐藥。對支原體zui有抑制活性及常用于支原體感染治療的抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內酯類及一些氟喹諾酮；其他類抗生素如氨基糖苷類、氯霉素對支原體有較小抑制作用，所以常不用來作為支原體感染的化學治療劑。
（四）細胞交叉污染對細胞的影響及污染物的檢測
細胞培養(yǎng)中，細胞間交叉污染并不罕見，多是由于在培養(yǎng)中操作時各種細胞同時進行，混雜使用器皿和液體所致，這種污染能使細胞的生長特性、形態(tài)特征等發(fā)生變化，有些變化較輕、不易察覺，有些可能由于污染的細胞具有生長優(yōu)勢zui終壓過原來細胞而導致細胞的生長抑制，zui終死亡。常用觀察細胞形態(tài)學、分析生長特性和核型、檢測細胞的標記物等方法檢測交叉污染的細胞。