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HT-29,人結(jié)腸癌細(xì)胞常備細(xì)胞說明

2019-05-28 瀏覽次數(shù):1286

HT-29,人結(jié)腸癌細(xì)胞常備細(xì)胞說明

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細(xì)胞樣本收集標(biāo)準(zhǔn)-收集貼壁細(xì)胞步驟:

1.移除細(xì)胞培養(yǎng)基。

2.沿著培養(yǎng)皿壁緩慢加入PBS(無鈣鎂離子),勿將細(xì)胞沖離培養(yǎng)皿,溫和晃動(dòng)培養(yǎng)皿,清洗細(xì)胞表面。

3.移除PBS。

4.加入細(xì)胞消化液(如胰蛋白酶等),使消化液能覆蓋所有細(xì)胞。在37℃孵育2-3min,溫和晃動(dòng)培養(yǎng)皿知道細(xì)胞開始剝離培養(yǎng)皿。

5.加入培養(yǎng)基終止消化,溫和重懸細(xì)胞

6.200X g,離心10min,收集細(xì)胞

7.移除上清液,用PBS清洗細(xì)胞沉淀兩次

8.后200X g,離心10min,收集細(xì)胞沉淀

收集懸浮細(xì)胞步驟:

1.將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中

2. 200X g,離心10min,收集細(xì)胞

3. 移除上清液,用PBS清洗細(xì)胞沉淀兩次

4. 后200X g,離心10min,收集細(xì)胞沉淀

送樣要求:

1. 基因組DNA: OD 260/280 在1.8~2.0之間, 濃度≥50ng/μl,體積≥20μl;

2. 新鮮細(xì)胞:(1)細(xì)胞數(shù)≥106;(2)貼壁細(xì)胞經(jīng)胰蛋白酶消化后,離心收集細(xì)胞沉淀;(3)懸浮細(xì)胞直接離心收集細(xì)胞沉淀;(4)PBS清洗細(xì)胞沉淀,盡可能去除培養(yǎng)基與胰酶;

3. 凍存細(xì)胞:細(xì)胞數(shù)≥106,凍存細(xì)胞從液氮罐中,37℃水浴復(fù)蘇,融化后離心收集細(xì)胞沉淀,盡可能去除凍存液,否則會(huì)影響DNA抽提質(zhì)量;

4. 樣本寄送:應(yīng)在送樣包裹中放置足量的冰袋或干冰,以減少在運(yùn)輸過程中因溫度變化導(dǎo)致DNA降解的可能;如無法使用冷凍寄送,請(qǐng)將細(xì)胞沉淀用真空抽干(無殘留任何液體、不可加熱);

5. 為了保證DNA抽提質(zhì)量,確保細(xì)胞在消化或凍存前,細(xì)胞狀態(tài)良好,處于生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期;

不建議以細(xì)胞懸液或細(xì)胞培養(yǎng)瓶形式寄送樣本

客戶須知:

1. 細(xì)胞系并非人體細(xì)胞,細(xì)胞來源的問題可能導(dǎo)致等位基因的不均一性,從而使STR位點(diǎn)具有潛在不均一性;

2. 八個(gè)位點(diǎn)+性別鑒定以外的位點(diǎn)為翼和贈(zèng)送的非標(biāo)準(zhǔn)位點(diǎn),翼和保證結(jié)果的真實(shí)性,其復(fù)雜性會(huì)高于標(biāo)準(zhǔn)性位點(diǎn).

備注:

1、用戶在寄送樣品時(shí),請(qǐng)將此表打印和樣品一并放入包裝中,包裝用泡沫箱和冰袋,建議順豐快遞;

2、人源細(xì)胞,公司會(huì)同DSMZ數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比較;數(shù)據(jù)庫無該類型細(xì)胞,則需要用戶自行上網(wǎng)比較

寄送注意事項(xiàng):細(xì)胞數(shù)量 10的6次方 左右 ,然后離心收集沉淀(如果是貼壁 先消化一下,如果是凍存的  先37度水浴復(fù)蘇10分鐘),收集沉淀離心后倒掉上清(用PBS清洗1遍,避免PCR抑制劑殘留影響結(jié)果),放入泡沫箱  +冰袋+送樣單填好打印,用順豐速運(yùn)我們

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