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技術文章 / article
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細胞人神經母細胞瘤細胞

2020-08-14 瀏覽次數:1656

SK-N-SH細胞人神經母細胞瘤細胞

1) 來源:蒂科生物細胞庫

2) 形態(tài):貼壁 上皮細胞樣  

3) 含量:>1x106 個/mL

4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

6) 運輸:順豐發(fā)貨

培養(yǎng)條件:

培養(yǎng)基:DMEM(L)+10% FBS(推薦HAKATA貨號:HN-FBS-500)

溫度:37℃     氣相:95%空氣,5%二氧化碳

傳代

1.用75%酒精噴灑整個培養(yǎng)瓶消毒,將其平躺置于培養(yǎng)箱中進行1-3小時的緩沖,.然后置于無菌操作臺,打開瓶口,將其中的培養(yǎng)液去掉,再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基(以T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據細胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液以及傳代,一般2到3天換一次液

2.待細胞長滿瓶底面積80%-90%,需要對其進行傳代,傳代比例為1:2到1:4

3傳代步驟:將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°預熱,倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,往培養(yǎng)瓶中加入3-5 ml PBS,輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2 ml預熱好的胰酶,置于37°孵育消化(diyi次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察,以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為jia消化時間,記錄jia消化時間,以便于下次消化),消化好后加入3ml*培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞,使之*脫落,然后收集細胞懸液,1200rpm離心3min,棄上清,加入*培養(yǎng)基重懸細胞,進行傳代。

凍存:

建議使用本公司無血清細胞凍存液貨號:H-W-100,用4度保存的冷凍液直接重懸細胞,不能預熱后使用。

保存條件:液氮存儲

溫馨提示(常見問題,處理方式

T25瓶為例;

1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數板計數。

2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。

3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

 

注:diyi次傳代推薦傳代比例為1:2,以后傳代比例可根據客戶需要自己決定。

細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。

 

熱銷細胞:

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H037 SPC-A-1 人肺腺癌細胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣

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H047 NCI-H1437 人肺癌細胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣

H048 HOS 人骨肉瘤細胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣

H049 Hela S3 人宮頸癌細胞 F12K+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣

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H051 SUP-B15 人Ph+急淋白血病細胞系 IMDM+20% FBS 懸浮 淋巴母細胞樣

H052 TF-1 人血液白血病細胞 RPMI1640+ 10% FBS+2ng/mL 重組人GM-CSF 懸浮 淋巴母細胞樣

H053 NCI-H446 人小細胞肺癌細胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣

H054 GES-1 人胃正常黏膜上皮細胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣

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H061 hela-luci Luciferase穩(wěn)定表達Hela細胞 DMEM(L)+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣

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H064 raji 人Burkitt's淋巴瘤細胞 RPMI-1640+10% FBS 懸浮 淋巴母細胞樣

H065 5637 人膀胱癌細胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣

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SK-N-SH細胞人神經母細胞瘤細胞

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