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技術文章 / article
ELISA檢測血清的詳細事項
2022-06-07 瀏覽次數：1707
大部分elisa檢測均以血清為標本。血清標本可按慣例方法收集，應留意防止溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質，以HRP為符號的ELISA測定中，溶血標本可能會添加非特異性顯色。血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染，菌體中可能含有內源性HRP，也會發生假陽性反應。
一般說來，在5天內測定的血清標本可放置于4℃。超越一周測定的需-20℃保存。凍住血清融解后，蛋白質局部濃縮，散布不均，應充沛混勻并防止發生氣泡。混濁或有沉積的血清標本應先離心或過濾，弄清后再檢測。重復凍融會使抗體效價下跌，所以測抗體的血清標本如需保存作屢次檢測，宜少量分裝冰存。保存血清自收集時就應留意無菌操作，也可參加適當防腐劑。
ELISA試劑盒檢測血清的詳細留意事項：
1) 要留意防止呈現嚴峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團，其有類似過氧化物的活性，因而，在以HRP為符號酶的ELISA測定中，如血清標本中血紅蛋白濃度較高，則其就很簡單在溫育過程中吸附于固相，然后與后邊參加的HRP底物反應顯色。
2) 冰凍保存的血清標本須留意防止因停電等形成的重復凍融。標本的重復凍融所發生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子發生損壞效果，然后引起假陰性結果。此外，凍融標本的混勻亦應留意，不要進行劇烈振蕩，重復倒置混勻即可。
3) 標本在保存中如呈現細菌污染所造成的的混濁或絮狀物時，應離心沉積后取上清檢測。
4) 樣本的收集及血清別離中要留意盡量防止細菌污染，一則細菌的成長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白發生分化效果;二則一些細菌的內源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應酶作符號的測定方法發生非特異性攪擾。
5) 血清標本如是以無菌操作別離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則主張冰凍保存。樣本的長期保存，應在-70℃以下。
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